ວິທີການເພີ່ມປະສິດທິພາບ HPLC ສໍາລັບການແຍກແລະຄວາມຖືກຕ້ອງທີ່ດີກວ່າ

ຄູ່ມືດ້ານວິຊາການສໍາລັບຜູ້ຈັດການຫ້ອງທົດລອງ, ຜູ້ພັດທະນາວິທີການ, ແລະທີມງານຈັດຊື້ HPLC

ການແຍກ HPLC ທີ່ດີກວ່າບໍ່ຄ່ອຍຈະມາຈາກການປ່ຽນແປງການຕັ້ງຄ່າແບບສຸ່ມ. ເລີ່ມຕົ້ນໂດຍການກໍານົດຄູ່ທີ່ສໍາຄັນ, ຂອບເຂດຈໍາກັດການລາຍງານທີ່ຕ້ອງການ, ແລະເງື່ອນໄຂການຍອມຮັບ; ຫຼັງ​ຈາກ​ນັ້ນ​, ການ​ຄັດ​ເລືອກ​ຫນ້າ​ຈໍ​, ອົງ​ປະ​ກອບ​ຂອງ​ອິນ​ຊີ​, pH​, ອັດ​ຕາ​ການ​ໄຫຼ​, ການ​ສັກ​ຢາ​, ແລະ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ໃນ​ຄໍາ​ສັ່ງ​ນັ້ນ​. ສໍາລັບການເຮັດວຽກປົກກະຕິ, ວິທີການ isocratic ທີ່ຫມັ້ນຄົງມັກຈະງ່າຍຕໍ່ການໂອນແລະກວດສອບ. ເມື່ອທາດປະສົມທີ່ຫຼັ່ງອອກມາຊ້າ ຫຼືໄລຍະຂົ້ວໂລກກວ້າງເຮັດໃຫ້ເວລາແລ່ນຫຼາຍເກີນໄປ, ການປັບສີອາດຈະຖືກຕ້ອງ. ເປົ້າຫມາຍການປະຕິບັດແມ່ນວິທີການທີ່ແກ້ໄຂຈຸດສູງສຸດທີ່ສໍາຄັນດ້ວຍການຍຶດຄືນແລະພື້ນທີ່ສູງສຸດ, ໃນຂະນະທີ່ຢູ່ໃນຄວາມກົດດັນ, ເຄື່ອງກວດຈັບ, ຖັນ, ແລະຂໍ້ຈໍາກັດຕົວຢ່າງຂອງເຄື່ອງມືຂອງທ່ານ.

1. ກໍານົດບັນຫາການແຍກຕົວກ່ອນການປ່ຽນແປງເງື່ອນໄຂ

ບັນທຶກອາການ: ການຮ່ວມ elution, tailing, drifting retention, backpressure, ການຕອບສະຫນອງອ່ອນແອ, ຫຼືເວລາແລ່ນຫຼາຍເກີນໄປ. ກໍານົດຄູ່ສູງສຸດທີ່ມີຄວາມສໍາຄັນກັບການຕັດສິນໃຈການປ່ອຍຫຼືການຄົ້ນຄວ້າ. ການປັບປຸງຄວາມບໍ່ສະອາດເລັກນ້ອຍໃນຂະນະທີ່ການເສຍສະລະຄູ່ນັ້ນບໍ່ແມ່ນການປັບປຸງ.

ກໍານົດເປົ້າຫມາຍທີ່ສາມາດວັດແທກໄດ້: ຄວາມສາມາດໃນການເຮັດຊ້ໍາຄືນ, ຄວາມແມ່ນຍໍາຂອງພື້ນທີ່, ການແກ້ໄຂຄູ່ສໍາຄັນ, ຫາງ, ແຜ່ນ, ແລະເວລາຮອບວຽນ. ບັນທຶກຕົວຢ່າງຕົວລະລາຍ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ, ປະລິມານສີດ, ຂະໜາດຖັນ, ທາດເພີ່ມ, ແລະຄວາມຍາວຄື່ນ ດັ່ງນັ້ນການປ່ຽນແປງການເລືອກສາມາດແຍກອອກຈາກຄວາມປ່ຽນແປງຂອງການກະກຽມ.

2. ປ່ຽນການຄັດເລືອກກ່ອນ: ຖັນເຄມີ, pH, ແລະສານລະລາຍອິນຊີ

ການເລືອກເຟັ້ນມັກຈະມີເລເຊີຫຼາຍກວ່າການປັບອັດຕາການໄຫຼໜ້ອຍ. ສໍາລັບການທົດສອບໄລຍະປີ້ນກັບກັນ, ປຽບທຽບໄລຍະ stationary ກັບຂະຫນາດຄວບຄຸມແລະຂະຫນາດ particle. C18 ເປັນຈຸດເລີ່ມຕົ້ນທີ່ເປັນປະໂຫຍດ, ບໍ່ແມ່ນຄໍາຕອບທົ່ວໄປ; ການວິເຄາະພື້ນຖານ, ເປັນກົດ, ແລະຂົ້ວສູງອາດຈະຕ້ອງການໄລຍະອື່ນຫຼືລະບົບການເພີ່ມເຕີມ.

ຄວບຄຸມ pH ດ້ວຍ buffer ທີ່ກໍານົດໄວ້ແລະກວດສອບວ່າ pH ສຸດທ້າຍຖືກວັດແທກຢູ່ໃນອົງປະກອບນ້ໍາທີ່ມີຈຸດປະສົງ. ການປ່ຽນແປງ pH ຂະຫນາດນ້ອຍສາມາດປ່ຽນແປງ ionization ການວິເຄາະແລະດັ່ງນັ້ນການເກັບຮັກສາແລະການຄັດເລືອກ. ຮັກສາຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ buffer, ຄໍາສັ່ງການກະກຽມ, ການກັ່ນຕອງ, ແລະການເກັບຮັກສາສອດຄ່ອງ. ຖ້າວິທີການໃຊ້ສານເຕີມແຕ່ງທີ່ລະເຫີຍ, ໃຫ້ກວດເບິ່ງຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ຂອງເຄື່ອງກວດຈັບແລະຄວາມສະອາດຂອງແຫຼ່ງກ່ອນທີ່ຈະປຽບທຽບຜົນໄດ້ຮັບ.

ຕົວລະລາຍຂອງໜ້າຈໍ ແລະອັດຕາສ່ວນແຍກຕ່າງຫາກ. Acetonitrile ແລະ methanol ສາມາດສະແດງໃຫ້ເຫັນການເລືອກທີ່ແຕກຕ່າງກັນຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມແຂງ elution ທີ່ຄ້າຍຄືກັນ. ປ່ຽນປັດໄຈຫນຶ່ງໃນເວລາຫຼືໃຊ້ການອອກແບບຂະຫນາດນ້ອຍ, ຫຼັງຈາກນັ້ນຢືນຢັນຜົນໄດ້ຮັບດ້ວຍໄລຍະມືຖືສົດ. ທາດລະລາຍທີ່ແຂງແຮງກວ່າອາດຈະເຮັດໃຫ້ການແລ່ນສັ້ນລົງ ແຕ່ບີບອັດຄູ່ທີ່ສຳຄັນ.

3. ເລືອກການປະຕິບັດແບບ isocratic ຫຼື gradient ໂດຍເຈດຕະນາ

ໃຊ້ elution isocratic ເມື່ອຕົວຢ່າງມີປ່ອງຢ້ຽມເກັບຮັກສາແຄບແລະການໂອນເລື່ອງງ່າຍ. ອົງປະກອບຄົງທີ່ເຮັດໃຫ້ຄວາມສົມດຸນງ່າຍແລະການແກ້ໄຂບັນຫາ. Gradient elution ຊ່ວຍໃນເວລາທີ່ຈຸດສູງສຸດໃນຕົ້ນປີຕ້ອງການເງື່ອນໄຂທີ່ອ່ອນແອແຕ່ທາດປະສົມທີ່ລ້າຊ້າສ້າງຫາງຍາວ; ມັນເພີ່ມປະລິມານທີ່ຢູ່ອາໄສ ແລະຕົວແປຄວາມສົມດຸນຄືນໃໝ່.

ສໍາລັບການເຮັດວຽກແບບ isocratic, ເພີ່ມປະສິດທິພາບອັດຕາສ່ວນອິນຊີປະມານຄູ່ທີ່ສໍາຄັນແລະກວດສອບການເກັບຮັກສາສູງສຸດຄັ້ງທໍາອິດທີ່ພຽງພໍ. ສໍາລັບການ gradient, ກໍານົດອົງປະກອບເລີ່ມຕົ້ນ, ramp, ລ້າງ, ແລະ re-equilibration ເວລາ. ຖ້າປະລິມານທີ່ຢູ່ອາໃສແຕກຕ່າງກັນລະຫວ່າງເຄື່ອງມື, ໃຫ້ກົງກັບເວລາຢູ່ໃນຖັນ inlet ແທນທີ່ຈະຄັດລອກພຽງແຕ່ຕາຕະລາງທີ່ມີໂຄງການ.

4. Tune ອັດຕາການໄຫຼແລະຄວາມກົດດັນພາຍໃນປ່ອງຢ້ຽມຄວບຄຸມ

ອັດຕາການໄຫຼຜົນກະທົບຕໍ່ປະສິດທິພາບ, ຄວາມກົດດັນ, ແລະເວລາການວິເຄາະ. ເລີ່ມຕົ້ນຢູ່ໃກ້ກັບຂອບເຂດທີ່ແນະນໍາຂອງຜູ້ສະຫນອງຖັນ, ຫຼັງຈາກນັ້ນທົດສອບປ່ອງຢ້ຽມແຄບຕ່ໍາຫາສູງໃນຂະນະທີ່ເບິ່ງຄວາມລະອຽດແລະຄວາມກົດດັນດ້ານຫລັງ. ການໄຫຼຕ່ໍາສາມາດປັບປຸງປະສິດທິພາບໃນບາງເງື່ອນໄຂແຕ່ເຮັດໃຫ້ການແລ່ນຍາວ; ການໄຫຼທີ່ສູງຂຶ້ນອາດຈະເພີ່ມການໄຫຼວຽນໃນຂະນະທີ່ການຫຼຸດຜ່ອນປະສິດທິພາບຫຼືເກີນຂີດຈໍາກັດຂອງຄວາມກົດດັນ. ຮັກສາຄວາມກົດດັນເປັນຂໍ້ຈໍາກັດໃນການດໍາເນີນງານທີ່ຫນັກແຫນ້ນ, ບໍ່ແມ່ນເປົ້າຫມາຍການປະຕິບັດ.

ChroMini HPLC LC-80MI ມີລະດັບອັດຕາການໄຫຼ 0.001-5.000 mL/ນາທີ, ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງການໄຫຼ <= +/-0.1% ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການທົດສອບທີ່ລະບຸໄວ້, ຄວາມແມ່ນຍໍາຂອງການໄຫຼຂອງ RSD <= 0.5%, ແລະຄວາມກົດດັນສູງສຸດຂອງ 5800 psi. ຄຸນຄ່າທີ່ເຜີຍແຜ່ເຫຼົ່ານີ້ຊ່ວຍກໍານົດປ່ອງຢ້ຽມການກວດກາດ້ານຂ້າງຂອງເຄື່ອງມື, ແຕ່ພວກມັນບໍ່ທົດແທນການຢືນຢັນວ່າຖັນ, ຄວາມຫນືດ, ອຸນຫະພູມ, ແລະໄລຍະມືຖືທີ່ທ່ານເລືອກຍັງຄົງຢູ່ໃນຂອບເຂດທີ່ປອດໄພ. ບັນທຶກຄວາມກົດດັນໃນວິທີການສຸດທ້າຍ, ຫຼັງຈາກສົມດຸນ, ແລະມີລະບົບທີ່ສະອາດເພື່ອໃຫ້ການວິນິດໄສໃນອະນາຄົດງ່າຍຂຶ້ນ.

5. ຈັບຄູ່ສີດ, ການກວດພົບ, ແລະອຸນຫະພູມກັບຕົວຢ່າງ

ປະລິມານສີດ ແລະ ຄວາມແຮງຂອງສານລະລາຍສາມາດສ້າງທາງໜ້າ, ແຕກອອກ, ຫຼືບິດເບືອນຈຸດສູງສຸດໃນຕົ້ນປີ. ຮັກສາຕົວລະລາຍຂອງຕົວຢ່າງບໍ່ເຂັ້ມແຂງກວ່າໄລຍະມືຖືເບື້ອງຕົ້ນໃນເວລາທີ່ປະຕິບັດໄດ້, ຫຼຸດຜ່ອນປະລິມານການສີດສໍາລັບຈຸດສູງສຸດທີ່ overloaded, ແລະຢືນຢັນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕໍ່ກັບລະດັບການເຮັດວຽກເສັ້ນຂອງເຄື່ອງກວດຈັບ. ກະກຽມ vials replicate ຈາກການແກ້ໄຂດຽວກັນກ່ອນທີ່ຈະປ່ຽນເງື່ອນໄຂ chromatographic; ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນຄວາມປ່ຽນແປງຂອງການກະກຽມສາມາດ masquerade ເປັນບັນຫາການແຍກ.

ກໍານົດຄວາມຍາວຂອງຄື້ນ UV ຈາກການວິເຄາະ spectrum ຫຼືວິທີການທີ່ຖືກຕ້ອງ, ບໍ່ແມ່ນມາຈາກມາດຕະຖານທົ່ວໄປ. Wincom LC-80MI ກໍານົດຂອບເຂດເຄື່ອງກວດຈັບ UV ຂອງ 190-680 nm ແລະລາຍຊື່ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຄວາມຍາວຄື້ນຂອງ +/-1 nm ແລະຄວາມແມ່ນຍໍາຕ່ໍາກວ່າ 0.1 nm. ເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນຂໍ້ເທັດຈິງເຄື່ອງມືທີ່ເປັນປະໂຫຍດສໍາລັບການວາງແຜນວິທີການ, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມອ່ອນໄຫວຕົວຈິງຍັງຂຶ້ນກັບການດູດຊຶມການວິເຄາະ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ, ສະພາບຂອງເຊນໄຫຼ, ແລະສິ່ງລົບກວນໃນວິທີການທີ່ສົມບູນ.

ອຸນຫະພູມສາມາດສະຖຽນລະພາບຄວາມຫນືດແລະການເກັບຮັກສາໄວ້, ແຕ່ມັນບໍ່ແມ່ນການປິ່ນປົວອັດຕະໂນມັດສໍາລັບການເລືອກທີ່ບໍ່ດີ. ຊ່ອງຖັນເຄື່ອງຄວບຄຸມອຸນຫະພູມຂອງ LC-80MI ແມ່ນທາງເລືອກ. ຢືນຢັນຂອບເຂດຂອງມັນ, ຄວາມຫມັ້ນຄົງ, ຫຼັກຖານການປັບທຽບ, ແລະຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ກັບຄໍລໍາແລະໄລຍະມືຖືຂອງທ່ານກ່ອນທີ່ຈະລະບຸມັນ.

6. ກວດສອບວິທີການທີ່ເໝາະສົມກັບຄວາມເໝາະສົມຂອງລະບົບ ແລະ ການກວດສອບຄວາມແຂງແຮງ

ຫຼັງ​ຈາກ​ການ​ເລືອກ​ເງື່ອນ​ໄຂ​, ດໍາ​ເນີນ​ການ replicate ມາດ​ຕະ​ຖານ​ຫຼື​ການ​ສັກ​ຢາ​ລະ​ບົບ​ທີ່​ເຫມາະ​ສົມ​. ກໍານົດຂອບເຂດຈໍາກັດກ່ອນທີ່ຈະທົບທວນຜົນໄດ້ຮັບ. ຕິດ​ຕາມ​ການ​ແກ້​ໄຂ​ຄູ່​ສໍາ​ຄັນ​, ຄວາມ​ສາ​ມາດ​ເຮັດ​ເລ​ື້ມ​ຄືນ​ຂອງ​ການ​ເກັບ​ຮັກ​ສາ​ໄວ້​, ຄວາມ​ແມ່ນ​ຍໍາ​ຂອງ​ພື້ນ​ທີ່​, tailing​, ແລະ​ຈໍາ​ນວນ​ແຜ່ນ​. ສັກໃສ່ຊ່ອງຫວ່າງສໍາລັບ carryover ແລະການກະກຽມ matrix ຕົວແທນສໍາລັບການແຊກແຊງ.

ທົດສອບຄວາມແຂງແຮງປະມານຈຸດທີ່ກໍານົດໄວ້ສໍາລັບອັດຕາສ່ວນອິນຊີ, pH, ການໄຫຼ, ອຸນຫະພູມ, ຄວາມຍາວຄື່ນ, ແລະປະລິມານສີດ. ໃຊ້ການປ່ຽນແປງທີ່ແທ້ຈິງແລະກໍານົດຕົວແປທີ່ຂົ່ມຂູ່ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ສໍາຄັນກ່ອນ. ຖັນເອກະສານຫຼາຍ, ການກະກຽມໄລຍະມືຖື, ປະລິມານຄວາມສົມດຸນ, ການຕັ້ງຄ່າ ແລະກົດລະບຽບການປະມວນຜົນ.

⭐ ແນະນຳລະບົບ HPLC Compact | Wincom ChroMini HPLC LC-80MI

ChroMini HPLC LC-80MI ຂອງພວກເຮົາແມ່ນລະບົບ isocratic ທັງຫມົດໃນຫນຶ່ງທີ່ປະສົມປະສານກັບປັ໊ມ LC-80, ເຄື່ອງກວດຈັບ UV80, ຫົວສີດຄູ່ມື 7725i, ສະຖານີບ່ອນເຮັດວຽກ WS-80, ແລະຖັນ C18 5 µm ID 4.6 × 250 ມມ. ການຕັ້ງຄ່າຂອງມັນສະຫນອງການຄວບຄຸມການໄຫຼຂອງ 0.001-5.000 mL / ນາທີ, ຄວາມກົດດັນສູງສຸດ 5800 psi, ແລະການກວດສອບ UV ຈາກ 190-680 nm.

ໃຊ້ ຫນ້າຜະລິດຕະພັນ ChroMini HPLC LC-80MI ເພື່ອກວດເບິ່ງການຕັ້ງຄ່າທີ່ລະບຸໄວ້, ຫຼັງຈາກນັ້ນສົ່ງຊື່ການວິເຄາະຂອງທ່ານ, ຖັນເຄມີ, ສູດມືຖື, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ, ປະລິມານການສີດ, ຄວາມລະອຽດເປົ້າຫມາຍ, ແລະຕົວຢ່າງທີ່ຄາດໄວ້ໂດຍຜ່ານພວກເຮົາ. ໜ້າຕິດຕໍ່ . ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາສາມາດຢືນຢັນໄດ້ວ່າການຕັ້ງຄ່າທີ່ຈັດພີມມາແມ່ນຈຸດເລີ່ມຕົ້ນທີ່ເຫມາະສົມ, ບໍ່ວ່າຈະເປັນຫ້ອງແຖວຂອງຖັນ thermostated ທາງເລືອກແມ່ນຕ້ອງການ, ແລະເອກະສານຫຼືອຸປະກອນເສີມທີ່ຄວນຈະຖືກລວມຢູ່ໃນວົງຢືມ.

ການເພີ່ມປະສິດທິພາບວິທີການກວດສອບໄດ້ທັນທີ

FAQs:

ເມື່ອໃດທີ່ຂ້ອຍຄວນປ່ຽນຈາກ isocratic ໄປສູ່ HPLC gradient?

ສະຫຼັບໃນເວລາທີ່ອົງປະກອບຄົງທີ່ບໍ່ສາມາດຮັກສາທາດປະສົມຕົ້ນໄດ້ຢ່າງພຽງພໍ ແລະ elute ທາດປະສົມຊ້າໃນໄລຍະເວລາທີ່ສົມເຫດສົມຜົນ, ຫຼືໃນເວລາທີ່ການຄັດເລືອກໃນທົ່ວຂອບເຂດຕົວຢ່າງຍັງບໍ່ດີ. ຖ້າການໂອນຄວາມລຽບງ່າຍແລະຄວາມທົນທານປົກກະຕິຄອບງໍາ, ຮັກສາວິທີການ isocratic ບ່ອນທີ່ມັນບັນລຸເປົ້າຫມາຍຄູ່ທີ່ສໍາຄັນ. ພວກ​ເຮົາ​ສາ​ມາດ​ທົບ​ທວນ​ຄືນ​ການ gradient ທີ່​ສະ​ເຫນີ​ໃຫ້​ມີ​ຂະ​ຫນາດ​ຖັນ​ຂອງ​ທ່ານ​, ປະ​ລິ​ມານ​ການ​ຢູ່​ອາ​ໃສ​, ແລະ​ຄວາມ​ຕ້ອງ​ການ​ການ​ສົມ​ດຸນ​ຄືນ​ໃຫມ່​ໂດຍ​ຜ່ານ​ການ​. ໝວດອຸປະກອນ HPLC .

LC-80MI ສາມາດຮອງຮັບວິທີການທີ່ຕ້ອງການກວດຫາ UV ຕໍ່າກວ່າ 200 nm ໄດ້ບໍ?

ຂອບເຂດ UV80 ທີ່ເຜີຍແຜ່ແມ່ນ 190-680 nm, ດັ່ງນັ້ນວິທີການທີ່ຕ້ອງການຄວາມຍາວຄື່ນໃນໄລຍະນັ້ນແມ່ນຢູ່ໃນຂອບເຂດຂອງເຄື່ອງກວດຈັບທີ່ລະບຸໄວ້. ຢືນຢັນການຕອບໂຕ້ການວິເຄາະຂອງທ່ານ, ການດູດຊຶມຜ່ານມືຖື, ສະພາບຂອງເຊນໄຫຼ, ແລະການຍອມຮັບສຽງດັງດ້ວຍການທົດສອບຄວາມເຫມາະສົມຂອງລະບົບກ່ອນທີ່ຈະປະຕິບັດວິທີການເປັນທີ່ຖືກຕ້ອງ. ເບິ່ງ ຂໍ້ມູນຈໍາເພາະຂອງ LC-80MI .

ຖັນ C18 ທີ່ສະໜອງໃຫ້ແມ່ນເໝາະສົມກັບທຸກໆການກວດ HPLC ບໍ?

ໝາຍເລກ C18 5 µm, ຖັນ 4.6 × 250 ມມ ແມ່ນການຕັ້ງຄ່າເລີ່ມຕົ້ນທີ່ກຳນົດໄວ້, ບໍ່ແມ່ນຫຼັກຖານສະແດງຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ຂອງການວິເຄາະທົ່ວໄປ. ສະຫນອງການວິເຄາະ polarity, pKa, matrix, ການແກ້ໄຂເປົ້າຫມາຍ, ແລະຕົວລະລາຍຈໍາກັດໃດໆເພື່ອໃຫ້ພວກເຮົາສາມາດຢືນຢັນວ່າຖັນທີ່ສະຫນອງແມ່ນເຫມາະສົມຫຼືໄລຍະ stationary ອື່ນຄວນຈະຖືກອ້າງອີງ. ເລີ່ມຕົ້ນດ້ວຍ ລະດັບອຸປະກອນຫ້ອງທົດລອງ ແລະລວມເອົາເງື່ອນໄຂເຫຼົ່ານັ້ນຢູ່ໃນການສອບຖາມຂອງທ່ານ.